سوالات و پاسخ های متداول در تهیه محلول گوانیدین تیوسیانات

گوانیدین تیوسیانات یک پروتئین تخریب کننده قوی است. این نه تنها می تواند پروتئین ها را به سرعت حل کند ، منجر به تکه تکه شدن ساختار سلولی شود و به دلیل تخریب ساختار ثانویه ، پروتئین های هسته ای را به سرعت از اسیدهای نوکلئیک جدا کند ، بلکه تأثیر تغییر رنگ قوی روی RNases نیز دارد. بنابراین ، گوانیدین تیوسیانات می تواند به عنوان یک داتاتور کننده برای سلولهای لیز کننده استفاده شود ، RNA را از پروتئین جدا کرده و RNA را در محلول آزاد کند. با این حال ، برخی از مشکلات اغلب در تهیه و استفاده از محلول گوانیدین تیوسیانات وجود دارد. این مقاله یک به یک به این مشکلات پاسخ می دهد.

آیا محلول گوانیدین تیوسیانات در حال حاضر نیاز به استفاده و آماده سازی دارد؟

غلظت نهایی گوانیدین تیوسیانات 4m به عنوان مثال بود: 42 میلی متر سیترات سدیم ، 0.83٪ n-Lauryl sarcosine (سدیم دودسیل ، n-methylglycine) ، 0.2mm β- تهیه بافر CSB از مرکاپتو اتانول. 25 گرم گوانیدین تیوسیانات و 33 میلی لیتر محلول بافر CSB مخلوط می شوند تا کاملا حل شوند. محلول دناتوره شده را می توان با حرارت دادن و حل شدن در دمای 65 درجه آماده کرد℃ و در 4 ذخیره می شود℃ برای آماده باش

بنابراین در حال حاضر نیازی به استفاده و تهیه محلول گوانیدین تیوسیانات نیست و در حال حاضر محلول‌هایی با غلظت‌های مختلف در بازار وجود دارد، اما زمان نگهداری آن چندان طولانی نیست، در غیر این صورت بارندگی وجود خواهد داشت که لازم است قبل از استفاده به دقت بررسی شود؛ علاوه بر این، اگر یک بار آماده سازی بیش از حد وجود دارد، توصیه می شود دوباره بسته بندی شود.

آیا محلول گوانیدین تیوسیانات پس از آماده سازی نیاز به استریل شدن دارد؟

لازم نیست محلول گوانیدین تیوسیانات را استریل کنید ، که بسیار پایدار نیست و عموماً 0.1٪ آب DEPC با محلول پیرولیز استفاده می شود و آب استریل شده است. علاوه بر این ، همه معرفها برای استخراج RNA باید با آب DEPC آماده شوند ، و معرف باید تازه باز شود و منحصراً برای RNA استفاده شود.

اگرچه لیز آماده شده نیازی به استریل شدن ندارد، اما باید توجه داشت که محصولات پلاستیکی مورد استفاده در آزمایش دارای علامت RNase free هستند. اگر برای استفاده باز نشده باشند، می توان مستقیما از آنها استفاده کرد. سایر موارد باید درمان شوند: DEPC را به آب مقطر دوبل اضافه کنید تا غلظت نهایی آن 0.1٪ باشد، محصولات پلاستیکی را در آن خیس کنید، آشپزخانه را یک شب تهویه کنید، سپس آنها را با فویل آلومینیومی، استریلیزاسیون با درجه حرارت بالا و فشار بالا برای حداقل 30 دقیقه ببندید. خشک و آماده به کار